科研實驗知識：ELISA 試劑盒原理

　　科研實驗知識：ELISA 試劑盒原理

　　ELISA(酶聯免疫吸附測定)試劑盒是一種基于抗原-抗體特異性結合的高靈敏度檢測技術，其核心原理是通過酶標記放大信號，實現目標物質的定性與定量分析。以下是天正信達技術小編對其關鍵原理和特點的詳細解析：

　　一、基本原理

　　抗原-抗體特異性結合?

　　ELISA利用抗原與抗體的高親和力結合特性，將待測物(抗原或抗體)與固相載體(如聚苯乙烯微孔板)上的抗體或抗原結合，形成穩定復合物?。例如，夾心法ELISA中，目標抗原被兩種抗體“夾心"捕獲，確保高特異性?。

　　酶標記信號放大?

　　通過將酶(如辣根過氧化物酶HRP)標記在抗體或抗原上，催化底物(如TMB)顯色，將微量結合信號轉化為可檢測的光信號?。顯色強度與目標物濃度呈正比，通過酶標儀測定吸光度(OD值)實現定量?。

　　固相載體與洗滌步驟?

　　抗原或抗體通過物理吸附或共價偶聯固定在微孔板表面，洗滌步驟可去除未結合物質，降低背景干擾?。洗滌是實驗成功的關鍵?。

　　二、主要類型及特點

　　直接法?

　　酶標記的一抗直接與目標抗原結合，操作簡單但靈敏度較低?。

　　間接法?

　　通過酶標二抗檢測一抗，信號放大效果更顯著，適用于低豐度目標物?。

　　夾心法?

　　需兩種抗體分別捕獲和檢測抗原，特異性高，適用于復雜樣本(如血清)?。

　　競爭法?

　　用于檢測小分子抗原，通過競爭結合減少顯色信號，適用于藥物殘留分析?。

　　三、技術優勢與局限

　　優勢?：

　　靈敏度高(可檢測pg/mL級目標物)?;

　　通量大(96孔板設計)?;

　　適用于多種樣本(血清、組織勻漿等)?。

　　局限?：

　　抗體質量直接影響結果?;

　　易受樣本中干擾物(如類風濕因子)影響?。

　　四、應用場景

　　ELISA試劑盒廣泛應用于：

　　疾病診斷?：如檢測炎癥因子(IL-6、TNF-α)預測疾病進展?;

　　藥物研發?：監測生物標志物(如白蛋白)評估藥效?;

　　食品安全?：檢測病原微生物(如沙門氏菌)?。

　　五、操作關鍵點

　　封閉步驟?：使用BSA或脫脂奶粉封閉未結合位點，減少非特異性吸附?。

　　孵育時間?：需嚴格控制(通常37℃孵育1-2小時)以確保充分結合?。

　　顯色控制?：底物反應時間過長易導致背景升高?。

　　注意：以上僅供參考，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。 Elisa試劑盒

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