GUS染色液常用于轉(zhuǎn)基因植物基因表達分析，其使用效果直接影響基因表達位點與活性判斷，以下5個關(guān)鍵控制點可保障染色結(jié)果的準確性和可靠性，避免假陽性或信號模糊等問題：
1.底物與染色液制備：染色液需嚴格按比例將濃縮液與緩沖液混勻配制，且優(yōu)先現(xiàn)配現(xiàn)用。核心底物應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會大幅降低染色效率。配制好的染色液短期可4℃避光保存3天，長期保存需分裝至棕色管并低溫冷藏。若底物溶液出現(xiàn)較深的紅色或棕色，說明部分失活，需評估后決定是否更換，防止影響顯色效果。
2.樣品預(yù)處理把控：需根據(jù)樣品類型調(diào)整處理方式，像部分植物的根、花等組織可直接染色，但莖、葉等致密組織需切成薄片，確保染色液滲透。對于體積大或結(jié)構(gòu)復(fù)雜的組織，可采用真空滲入法輔助底物進入細胞。同時要保證樣品新鮮，避免存放過久導(dǎo)致酶活性流失，且需確保
GUS染色液浸沒樣品，杜絕局部未染色的情況。
3.孵育條件精準控制：孵育需在37℃避光環(huán)境下進行，時間根據(jù)基因表達量調(diào)整為1-24小時。表達量高的樣品可縮短時間，避免藍色沉淀過度擴散；表達量低的樣品則需延長孵育時間，但不能超出上限，防止非特異性顯色。孵育過程中需保持環(huán)境穩(wěn)定，溫度波動會干擾酶促反應(yīng)，影響染色均勻性。
4.脫色流程規(guī)范操作：綠色植物樣品需用70%乙醇脫色，通常脫色2-3次，每次時長根據(jù)材料調(diào)整，直至陰性對照呈白色。若脫色不全，葉綠素殘留會遮擋藍色斑點；若過度使用高濃度乙醇或延長時間，可能導(dǎo)致藍色沉淀脫落。必要時可重復(fù)脫色步驟，確保背景干凈，讓表達位點清晰呈現(xiàn)。
5.對照設(shè)置與結(jié)果校準：實驗必須同步設(shè)置陰性和陽性對照。陰性對照選用未轉(zhuǎn)入目標(biāo)基因的同類組織，陽性對照采用已知GUS活性的樣品。通過對照可排除環(huán)境或內(nèi)源物質(zhì)干擾，判斷是否存在假陽性。染色后觀察時，需以對照為標(biāo)準，確認白色背景下的藍色斑點為特異性表達位點，避免將雜質(zhì)或非特異性顯色誤判為目標(biāo)信號。
